Metodo in microscala per la determinazione del profilo di temperatura di attività enzimatiche: il caso dell’attività xilanasica fungina

Questo lavoro ha riguardato lo sviluppo di un metodo rapido in microscala per la determinazione del profilo di attività enzimatica in funzione della temperatura di numerosi campioni in parallelo. Il metodo si basa sull’utilizzo di un termociclatore per PCR capace di produrre un gradiente di temperatura in una piastra a 96 pozzetti per testare contemporaneamente fino ad 8 campioni per 12 diverse temperature. Il metodo è stato messo a punto saggiando in micropiastre l’attività xilanasica di funghi filamentosi provenienti dal deserto freddo di Atacama, Cile, in confronto a xilanasi commerciali da funghi mesofili e da microrganismi termofili. Il metodo proposto consente la riduzione dei tempi di screening. La maggior parte degli estratti enzimatici ha mostrato ottimi di temperatura intorno a 42 °C, inferiori di 10- 35 °C rispetto agli enzimi commerciali da funghi mesofili/ termofili. Sono stati inoltre osservati 3 estratti che mantenevano il 30% di attività a 22 °C, mentre per la maggioranza degli estratti è stata rilevata un’attività inferiore al 3% alla temperatura di 63 °C. Il metodo può essere facilmente adattato per determinare stabilità e profilo di temperatura di diverse attività enzimatiche fungine. I principali vantaggi consistono nell’ottimo controllo della temperatura e nella possibilità di effettuare fino a 8 profili in parallelo.